RIPA裂解液（強(qiáng)）說(shuō)明書(shū)
RIPA Lysis Buffer
目錄號(hào)：K2333
保存條件：4℃保存。
組分說(shuō)明
Cat. No. K2333
Volume 100 ml
本產(chǎn)品僅供科研使用，請(qǐng)勿用于臨床診斷及其他用途產(chǎn)品簡(jiǎn)介
RIPA裂解液是一種傳統(tǒng)的組織以及細(xì)胞快速裂解液，主要用于從動(dòng)物組織和哺乳
動(dòng)物細(xì)胞中抽取可溶性蛋白，可用于裂解貼壁細(xì)胞和懸浮細(xì)胞。按照其裂解液的強(qiáng)度
可以分為強(qiáng)、中、弱三類，具體特點(diǎn)和差異請(qǐng)參考附表2，可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求選擇相應(yīng)產(chǎn)
品。RIPA裂解液（強(qiáng)）可以有效提取細(xì)胞核、細(xì)胞膜和胞漿蛋白，提取的蛋白可應(yīng)用
于蛋白定量、Western Blot、IP等檢測(cè)分析。
RIPA裂解液（強(qiáng)）的主要成分為50mM Tris（pH 7.4），150mM NaCl，1%Triton
X-100，1% sodium deoxycholate，0.1% SDS以及sodium orthovanadate，sodium
fluoride，EDTA，leupeptin等多種抑制劑，可有效抑制蛋白降解。
注意事項(xiàng)
1．為防止蛋白降解，所有的操作盡量在冰上進(jìn)行。
2．使用RIPA裂解液得到的蛋白樣品，可采用BCA法進(jìn)行蛋白定量，以測(cè)定蛋白濃度。
產(chǎn)品可單獨(dú)向本公司訂購(gòu)，如：YJ0014 BCA蛋白定量試劑盒。本品含有高濃度的
去垢劑，不能用Bradford法進(jìn)行蛋白定量。
3．建議在使用RIPA裂解液前，向溶液中加入蛋白酶抑制劑或磷酸酶抑制劑，以防止蛋
白降解，或保持蛋白的磷酸化狀態(tài)。產(chǎn)品可單獨(dú)向本公司訂購(gòu)，如：K2200 蛋白酶抑制劑混合物，K2383 磷酸酶抑制劑混合物。
4．若需獲得更高濃度的蛋白，應(yīng)減少哺乳動(dòng)物蛋白抽提試劑的使用量。
5．對(duì)于培養(yǎng)瓶中的貼壁細(xì)胞，推薦先使用常規(guī)方法消化細(xì)胞，再參考懸浮細(xì)胞蛋白提
取步驟操作。
6．對(duì)于離心獲得的細(xì)胞，若不確定細(xì)胞體積，可根據(jù)細(xì)胞數(shù)量計(jì)算RIPA裂解液的使用
量。如5×106個(gè)Hela細(xì)胞約需加入500 μl RIPA裂解液，以此類推。
操作步驟
I 細(xì)胞樣品
· 貼壁細(xì)胞蛋白抽提
1．小心傾去貼壁細(xì)胞的培養(yǎng)液。
2．可選步驟：若培養(yǎng)基中含有酚紅或其他可能影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的物質(zhì)，請(qǐng)先使用預(yù)冷的
PBS漂洗細(xì)胞。
3．加入適量RIPA裂解液（使用前2-3分鐘內(nèi)加入蛋白酶抑制劑），試劑使用量請(qǐng)參考
附表1，在冰上用槍頭吹打貼壁細(xì)胞。
表 1 貼壁細(xì)胞RIPA 裂解液使用量推薦表
細(xì)胞培養(yǎng)板類型或培養(yǎng)面積 RIPA 裂解液使用量
100 mm* 500-1,000 µl
60 mm 250-500 µl
6 孔培養(yǎng)板 200-400 µl /孔
24 孔培養(yǎng)板 100-200 µl /孔
96 孔培養(yǎng)板 50-100 µl /孔
* 對(duì)于100 mm培養(yǎng)板培養(yǎng)的107個(gè)細(xì)胞 (50 mg)可裂解獲得約3 mg總蛋白（細(xì)胞類型不同略有差異）。
4．將裂解液轉(zhuǎn)移至新的離心管中，冰上孵育20分鐘，使細(xì)胞充分裂解。
5．14,000×g離心10分鐘。轉(zhuǎn)移上清液至新管中，進(jìn)行下一步分析。
· 懸浮細(xì)胞蛋白提取
1．懸浮細(xì)胞2,500×g，離心5分鐘，棄去上清。
2．可選步驟：若培養(yǎng)基中含有酚紅或其他可能影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的物質(zhì)，請(qǐng)使用PBS漂洗
細(xì)胞。漂洗后的細(xì)胞懸浮液2,500×g離心5分鐘，棄去上清。
3．加入適量RIPA裂解液（使用前2-3分鐘內(nèi)加入蛋白酶抑制劑），每5×106細(xì)胞加入約
200-500 µl RIPA裂解液，吹打均勻。
4．冰上放置20分鐘，使細(xì)胞充分裂解。
5．14,000×g離心10分鐘。轉(zhuǎn)移上清液至新管中，進(jìn)行下一步分析。
II 組織樣品
1．取適當(dāng)?shù)?/font>RIPA裂解液，在使用前2-3分鐘內(nèi)加入蛋白酶抑制劑。
2．稱量實(shí)驗(yàn)組織的重量，按照1：10（g/ml）的比例加入RIPA裂解液后將組織剪成細(xì)
小碎片，用電動(dòng)勻漿器勻漿處理。若需要濃縮的蛋白提取物，可適當(dāng)減少組織蛋白
抽提試劑使用量。
3．冰上孵育20分鐘，使細(xì)胞充分裂解。
4．14,000×g 離心10分鐘。轉(zhuǎn)移上清液至新管中，進(jìn)行下一步分析。
注：RIPA裂解液的裂解產(chǎn)物中可能會(huì)出現(xiàn)一小團(tuán)透明膠狀物，屬正常現(xiàn)象。該透明膠狀物為基因組。
相關(guān)產(chǎn)品信息
目錄號(hào) 產(chǎn)品名稱
K2333 RIPA裂解液（強(qiáng)）
K2334 RIPA裂解液（中）
K2335 RIPA裂解液（弱）
K2336 RIPA裂解液（強(qiáng)中弱套裝）
K2337 SDS裂解液
K0002/K0889 哺乳動(dòng)物蛋白抽提試劑/哺乳動(dòng)物蛋白抽提試劑盒
K0004/K0891 組織蛋白抽提試劑/組織蛋白抽提試劑盒
K0199B Nc-細(xì)胞核/漿蛋白抽提試劑盒
K2200 蛋白酶抑制劑混合物
K2383 蛋白磷酸酶抑制劑混合物
K0014 BCA蛋白定量試劑盒
K0022 SDS-PAGE凝膠制備試劑盒
K0023 ProteinShow-G250蛋白快速染色試劑
實(shí)驗(yàn)代做服務(wù)：
實(shí)驗(yàn)室代做實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目
| |||
| 染色質(zhì)免疫沉淀分析(CLIP)實(shí)驗(yàn)服務(wù)
| ||
| |||
|
