BCA蛋白定量試劑盒說(shuō)明書(shū)
BCA Protein Assay Kit
BCA蛋白定量試劑盒
目錄號(hào)：K0014
保存條件：BSA標(biāo)準(zhǔn)品2-8℃保存，其它組分室溫保存。
組分說(shuō)明
Cat. No. K0014
Kit Size 500 次/微孔，50 次/試管
試劑 A 100 ml
試劑 B 3 ml
BSA 標(biāo)準(zhǔn)品 （2mg/ml） 2 ml
本產(chǎn)品僅供科研使用，請(qǐng)勿用于臨床診斷及其他用途
產(chǎn)品簡(jiǎn)介
BCA蛋白定量法是目前廣泛使用的蛋白定量方法之一。本產(chǎn)品是基于 BCA（Bicin
-choninic Acid）法研制而成，實(shí)現(xiàn)了對(duì)蛋白質(zhì)進(jìn)行快速、穩(wěn)定、靈敏的濃度測(cè)定。其
原理是在堿性環(huán)境下蛋白質(zhì)分子中的肽鏈結(jié)構(gòu)能與Cu2+絡(luò)合生成絡(luò)合物，同時(shí)將Cu2+還
處原成有高的光吸收Cu+。BCA試劑值，可敏感特異地與顏色的深淺與蛋白Cu結(jié)質(zhì)濃合，形成度成正比，可根據(jù)吸收穩(wěn)定的有顏色的復(fù)值合物。在的大小來(lái)562測(cè) 定蛋nm
白質(zhì)的含量。本試劑盒含有牛血清白蛋白（ BSA）溶液作為蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)品溶液，測(cè)定
范圍為20～2000 μg/ml。
注意事項(xiàng)
1．本產(chǎn)品可以采用分光光度計(jì)（試管檢測(cè)法）或者酶標(biāo)儀（微孔檢測(cè)法）測(cè)定蛋白濃度。
2．建議每次測(cè)定蛋白樣品時(shí)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，以獲得準(zhǔn)確數(shù)據(jù)。
3．BSA標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋液需與待測(cè)樣品的稀釋液一致（可用1×PBS或0.9%生理鹽水進(jìn)行
稀釋）。
4．完成37℃孵育30分鐘或室溫孵育2小時(shí)后，須在3-5分鐘內(nèi)完成檢測(cè)，否則會(huì)影響蛋
白定量的準(zhǔn)確度。
5．如待測(cè)樣品中含較多的干擾物質(zhì)（具體見(jiàn)附表1），可采用Bradford法蛋白定量試劑
盒（K0013）或其他蛋白定量產(chǎn)品。
操作步驟
1．稀釋BSA標(biāo)準(zhǔn)品：用與待測(cè)蛋白樣品相一致的稀釋液按下表稀釋BSA標(biāo)準(zhǔn)品。
管號(hào) 稀釋液用量（μl） BSA標(biāo)準(zhǔn)品用量（μl） BSA標(biāo)準(zhǔn)品終濃度（μg/μl）
A 0 100 2
B 200 200 1
C 200 200（從B管中取） 0.5
D 200 200（從C管中取） 0.25
E 200 200（從D管中取） 0.125
F 200 200（從E管中取） 0.0625
G 200 0 0（空白）
2．配置BCA工作液：
1）計(jì)算BCA工作液總量：
BCA工作液總量=（BSA標(biāo)準(zhǔn)品樣本個(gè)數(shù)+未知樣本個(gè)數(shù)）×復(fù)孔數(shù)×每個(gè)樣本BCA工作液體積
舉例：BSA標(biāo)準(zhǔn)品樣本個(gè)數(shù)為7個(gè)，未知樣本個(gè)數(shù)2個(gè)，復(fù)孔數(shù)3個(gè)。
試管檢測(cè)法：
BCA工作液總量=(7個(gè)BSA標(biāo)準(zhǔn)品樣本+2個(gè)未知樣本)×3個(gè)復(fù)孔×2 ml/每個(gè)樣本工作液體積=54 ml
微孔檢測(cè)法：
BCA工作液總量=(7個(gè)BSA標(biāo)準(zhǔn)品樣本+2個(gè)未知樣本)×3個(gè)復(fù)孔×200 μl/每個(gè)樣本工作液體積=5.4ml
2）根據(jù)計(jì)算出的BCA工作液需要總量，將試劑A和試劑B按照50：1的體積比，配制
BCA工作液，充分混勻。
注意：1）由于加樣可能存在誤差，建議配制BCA工作液時(shí)，多配制1-2個(gè)孔。
2）新配制的BCA工作液室溫密封條件下可穩(wěn)定保存24小時(shí)。
3．定量檢測(cè)
3a.試管檢測(cè)法（蛋白濃度檢測(cè)范圍：20-2000 μg/ml）
1）按上表，將稀釋好的A-G BSA標(biāo)準(zhǔn)品和待測(cè)蛋白樣品（原液或稀釋液）各100 μl
分別加到作好標(biāo)記的試管中。推薦每個(gè)測(cè)定的樣本做2-3個(gè)平行反應(yīng)。
2）向每個(gè)試管中各加入2 ml BCA工作液，充分混勻，37℃水浴中孵育30分鐘或室
溫孵育2小時(shí)。
3）將各管冷卻至室溫。
4）用分光光度計(jì)在562 nm處測(cè)定每個(gè)樣品及BSA標(biāo)準(zhǔn)品的吸光值，同時(shí)做好記錄。
5）繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算樣品中的蛋白濃度。
3b.微孔檢測(cè)法（蛋白濃度檢測(cè)范圍：20-2000 μg/ml）
1）按上表，將稀釋好的A-G BSA標(biāo)準(zhǔn)品和待測(cè)蛋白樣品（原液或稀釋液）各25 μl分
別加到作好標(biāo)記的96孔板微孔中。推薦每個(gè)測(cè)定的樣本做2-3個(gè)平行反應(yīng)。
2）每孔加入200 μl BCA工作液，充分混勻，蓋上96孔板蓋，37℃孵育30分鐘。
3）冷卻至室溫。
4）用酶標(biāo)儀在540-590 nm范圍內(nèi)，測(cè)定每個(gè)樣品及BSA標(biāo)準(zhǔn)品吸光值，做好記錄。
5）繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算樣品中的蛋白濃度。
注意：1）BCA法測(cè)定蛋白濃度時(shí)，吸光值會(huì)隨著時(shí)間的延長(zhǎng)不斷加深。因此所有樣品測(cè)定需在3-5 分鐘內(nèi)完成，否則會(huì)影響蛋白定量的準(zhǔn)確度。
2）建議以去除背景值后的吸光值讀數(shù)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
3）由于操作誤差導(dǎo)致標(biāo)準(zhǔn)品讀數(shù)嚴(yán)重偏離線性曲線的應(yīng)舍去。
4）未知樣品濃度可以從標(biāo)準(zhǔn)曲線方程中計(jì)算得出, 實(shí)際濃度需要乘以樣品的稀釋倍數(shù)。
5）如果得到的蛋白濃度不在檢測(cè)范圍內(nèi)，請(qǐng)重新稀釋樣品后再次測(cè)定。
4．BCA蛋白定量分析結(jié)果舉例：
